通过分子检测协助病理诊断
某些肿1瘤具有特定的分子病理学改变,对于病理常规染色难于诊断的这些肿1瘤,进行分子病理检测可协助得出准确的病理诊断。例如淋巴1瘤的鉴别诊断往往依赖于形态和免1疫组化的综合判断,但有些时候,这些手段也不能满足诊断的需要,这时我们通过IG或TCR基因重排检测,可协助鉴别淋巴细胞的普通增殖和肿1瘤性增殖。
原位杂交杂交液注意事项:
(1)杂交液内除含一定浓度的标记探针外,还含有较高浓度的盐类、甲酰胺、硫酸葡聚糖、牛血1清白蛋白及载体DNA或RNA等。
(2)杂交液中含有较高浓度的Na+可使杂交率增加,可以减低探针与组织标本之间的静电结合。甲酰胺可使Tm降低,杂交液中含每1%的甲酰胺可分别使RNA:RNA,RNA:DNA,DNA:DNA的杂交温度降低0.35℃,0.5℃和0.65℃。,所以杂交液中加入适量的甲酰胺,可避免因杂交温度过高而引起的组织形态结构的破坏以及标本的脱落。硫酸葡聚糖能与水结合,从而减少杂交液的有效容积,植物原位杂交技术服务,提高探针有效浓度,以达到提高杂交率的目的(尤其对双链核酸探针)。
在杂交液中加入牛血1清白蛋白及载体DNA或RNA等,都是为了阻断探针与组织结构成分之间的非特异性结合,以减低背景。
1、组织取材:组织取材应尽可能新鲜。由于组织RNA降解较快,所以新鲜组织和培养细胞在30 min 内固定。
2、细胞组织固定目的与注意事项:
(1)保持细胞结构;
(2)大限度地保持细胞内DNA或RNA的水平;
(3)使探针易于进入细胞或组织。
常用的固定剂是多聚甲醛,与其它醛类固定剂不同,多聚甲醛不会与蛋白质产生广泛的交叉连接,因而不会影响探针穿透入细胞或组织。