PCR仪的校准主要包括温度校准和灵敏度校准。
温度校准:
使用温度探头,如铂电阻温度传感器(PT100)或热电偶(Thermocouple),将探头插入PCR反应管中,通过测量温度并与实验室中的已知温度进行比较,从而校准PCR仪的温度。
利用具有已知熔解温度的DNA片段作为模板,在PCR过程中进行熔解曲线分析,通过比较实验结果与已知结果,确定PCR仪的温度准确性。
使用二色荧光染料,如SYBR Green,添加到PCR反应体系中,利用其特的荧光特性,在PCR过程中进行熔解曲线分析,通过比较实验结果与已知结果,确定PCR仪的温度准确性。
校准PCR仪自带的温度传感器,这些传感器通常经过严格的标定,提供准确的温度测量。
灵敏度校准:
使用已知浓度的模板DNA进行PCR反应,观察是否能够正确检测到目标基因,以此来评估灵敏度。
校准的目的是确保PCR仪的准确性和可靠性,从而提高实验结果的可靠性。不同类型的PCR仪(如实时荧光定量PCR仪和普通PCR仪)可能需要不同的校准方法和标准,具体的校准方法和标准应根据PCR仪的型号和厂家提供的说明进行选择。此外,校准周期也是重要的考虑因素,例如实时荧光定量PCR仪建议每季度进行一次校准,而普通PCR仪建议每年进行一次校准。