取消

小学实验实验釜科学实验化学实验中学实验实验中央台小学科学实验物理实验

商品
详情

双分子荧光互补实验（BiFC）

面议

参数

否是否进口
南京产地
实验服务分类

发货地江苏南京 5天内发货供货总量999盒

南京瑞源生物技术有限公司: 进入店铺在线咨询

荧光素酶互补（LCA）面议

免疫沉淀-质谱分析技术服务（IP-MS）面议

AI多模态蛋白筛选化合物技术服务面议

数字化蛋白/核酸互作预测模型面议

数字化文库构建技术服务面议

蛋白互作与结合位点预测分析面议

产品详情

技术原理

双分子荧光互补（Bimo-lecular fluorescence complementation，简称BiFC），将荧光蛋白分割成两个不具有荧光活性的分子片段（N-fragment、C-fragment），将这两个荧光蛋白的片段分别融合两个目标蛋白A、B，如果A与B蛋白发生了相互作用，在空间上互相靠近，就会重新构建成完整的具有活性的荧光蛋白分子，在激发光的激发下，荧光蛋白发出荧光。反之，若A与B蛋白之间没有相互作用，则不能被激发岀荧光。

应用场景

验证蛋白质之间是否存在相互作用，可与酵母双杂、Co-IP等实验结果相互验证；

技术优势

1. 适用于体内和体外蛋白相互作用的验证；
2. 实验中的蛋白处于天然状态，并能直观观察蛋白相互作用在细胞中的定位；实验周期短；
3. 相对于FRET和BRET技术对仪器的要求高、数据处理复杂的情况，BiFC只需要荧光倒置显微镜，数据处理简单，只检测荧光的有无，背景干净，检测更灵敏，不依赖于其他次级效应；
4. 还可以用于研究蛋白之间的弱相互作用或瞬间相互作用；
5. 不需要蛋白有特别的理论配比，能检测到不同亚群蛋白间的相互作用

技术步骤

1. 植物材料以及菌株的保存与培养

2. 基因克隆及重组质粒的构建

3. 大肠杆菌***0感受态的制备和转化

4. 农杆菌GV3101感受态的制备和转化

5. 农杆菌介导的瞬时表达体系

6. 烟草叶片荧光检测

送样指南

虚拟样品：需要提供两个蛋白质的CDS序列信息，

实体样品：

样品类型

要求

邮寄条件

备注

质粒

1. 浓度>100ng/uL

2. 体积>50uL

冰袋

测序结果

大肠杆菌

体积>1mL（加甘油）

干冰

1. 测序结果

2. 菌液抗性

服务内容

服务内容	工作日	交付材料
1. 基因合成/载体构建 A基因构建到 pCAMBIA1300-nYFP、 B基因构建到 pCAMBIA1300-cYFP	10个	1. 基因合成/载体构建的质粒及测序验证报告 2. 原始数据、结果图片 3. 标准实验报告(含实验步骤、流程)
2. 烟草注射 3. 烟草叶片荧光检测	8个
4. 数据整理	2个

服务说明

1. 本实验默认在烟草中进行。

2. 阳性对照组有荧光，而阴性对照无，则认为对照组正常，实验成功。

3. 若阳性、阴性对照正常，且实验组检测到荧光则认为两个蛋白互作。

案例展示

以A-nYFP与cYFP、nYFP与B-cYFP组合作为阴性对照，排除载体的影响，结果表明A与B互作，并且发生在细胞核中。

图1 A与B在烟草中的互作情况

参考文献

1. Wenyuan Ruan,Meina Guo,Xueqing Wang, et al. Two RING-Finger Ubiquitin E3 Ligases Regulate the Degradation of SPX4, An Internal Phosphate Sensor, for Phosphate Homeostasis and Signaling in Rice. Molecular Plant. 2019;12 (8):1060-1074.

2. Brett Burdo,John C. Gray,M. Paula Goetting-Minesky, et al. The Maize TFome – development of a transcription factor open reading frame collection for functional genomics. The Plant Journal. 2014;80 (2):356-366.

3. Bin Ou,Kangquan Yin,Sai-Nan Liu, et al. A High-Throughput Screening System for Arabidopsis Transcription Factors and Its Application to Med25-Dependent Transcriptional Regulation. Molecular Plant. 2011;4 (3):546-555.

为您推荐