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黄曲霉毒素B1酶联检测试剂盒可用于检测饲料中的黄曲霉毒素B1含量、谷物中的黄曲霉毒素B1含量。
以下为饲料、谷物中的黄曲霉毒素B1检测试剂盒的使用说明，欲了解更多产品可联系我公司0755-28759478。
1 概述
黄曲霉毒素是由黄曲霉菌属的黄曲霉和寄生曲霉等产生的次级代谢产物，主要污染玉米、花生、坚果等。天然污染的黄曲霉毒素以AFB1为主，AFB1具有***的急性毒性和致癌性，肝脏是其主要的靶器官。
本试剂盒采用竞争一步ELISA方法，则能快速、准确地检测谷物、饲料中的黄曲霉毒素。
2 原理
本试剂盒采用竞争一步ELISA方法。样品中的游离黄曲霉毒素B1与酶标记的黄曲霉毒素B1竞争结合酶标板微孔中固相化的黄曲霉毒素B1特异性抗体，通过洗涤洗掉未结合的酶标记黄曲霉毒素B1，再通过酶的专一性显色剂显色根据显色的深浅来判断样品中黄曲霉毒素B1。根据竞争性原理，如果样品中的游离黄曲霉毒素B1量少，则酶标记的黄曲霉毒素B1结合的多，显色深，反之，则显色浅。检测时设置标准曲线，通过标准曲线测定样品中黄曲霉毒素B1的含量。
3 试剂盒组成
3.1 黄曲霉毒素（AFB1）酶标板：96孔
3.2 黄曲霉毒素（AFB1）标准品：6瓶（1ml/瓶），分别是：
标准品 | ① | ② | ③ | ④ | ⑤ | ⑥ |
浓度ng/ml | 0 | 0.05 | 0.15 | 0.45 | 1.35 | 4.05 |
3.3 黄曲霉毒素（AFB1）酶标记物：1瓶（6ml）
3.4 浓缩洗涤液：1瓶（10×，50ml）
3.5 底物液A：1瓶（6ml）
3.6 底物液B：1瓶（6ml）
3.7 终止液：1瓶（6ml）
3.8 说明书：1份
3.9 质控报告：1份
4 需要而未提供的材料
4.1 设备：
粉碎机、波长450nm酶标仪、量筒
容量瓶、振荡器、微量移液器
4.2 试剂：
去离子水或蒸馏水、甲醇（分析纯）
5 贮存
5.1 试剂盒贮存于2~8℃，切勿冷冻
5.2 未用完的微孔板应该密封干燥保存
5.3 该产品有效期为12个月
6 注意事项
6.1 使用试剂盒前请仔细阅读说明书。
6.2 试剂盒使用前，将试剂恢复至室温（20-25℃）。
6.3 不要使用过期试剂盒；不同批号试剂盒中的试剂不得混用；不同标准品、样品所用吸头不能混用；所有样品温度应恢复至室温（20-25℃）。
6.4 避免所有试剂接触皮肤；使用过的玻璃容器及黄曲霉毒素（AFB1）溶液好用pH 7的高氯酸溶液（10%V/V）浸泡过夜。6.5 配制的70%甲醇水应密封保存或现配现用，以免甲醇浓度变化影响检测结果。
7 试剂配制
7.1 洗涤工作液：
用去离子水将浓缩洗涤液按1：9体积进行稀释
例如：10ml洗涤工作液=1ml浓缩洗涤液+9ml去离子水
7.2 1%NaCl溶液：
准确称取1g NaCL固体溶解于去离子水中并定容至100ml；其它配制体积按此比例换算配制。
7.2 样本提取液：
7.2.1 70%甲醇：
用去离子水将甲醇（分析纯）按7：3体积进行稀释。
例如：100ml70%甲醇=70ml 甲醇+30ml 去离子水
7.2.2 样本提取液：准确称取1g NaCL固体溶解于70%甲醇中并用70%甲醇定容至100ml，配制成为样本提取液；其它配制体积按此比例换算配制。
8 样品处理程序
8.1取2g代表性样品（饲料等大颗粒样本需要粉碎），加20ml样本提取液 ，***振荡5分钟，用 5000r/min离心10min；
8.2取上清液用1%NaCl溶液对半稀释，例如100μl上清液+100μl1%NaCL溶液，混匀待检；
8.3用NaOH或HCL将8.2中的上清液PH 至中性，取50μl用于实验。
注意：稀释倍数20；样本检测浓度超过试剂盒检测范围时，离心后取上清液先用样本提取液稀释到检测范围内，然后再用1%NaCl溶液进一步对半稀释，混匀，准备进行分析检验。
9 酶免分析步骤
9.1 实验准备
9.1.1预行编号，标记标准品和样品的位置，进行双孔检测；
9.1.2使用前将所有试剂回升至室温,取所需数量的微孔条，将多余板条用试剂盒提供的自封袋重新密封同时排除里面空气，并立即放回2~8℃干燥保存。
9. 2 分析步骤
9.2.1加样：在标准品孔中加入50μl各标准品溶液，在各样品孔中加入50μl样品溶液；
9.2.2 温育：在所有孔中加入50μl的黄曲霉毒素B1酶标记物溶液，轻微晃动反应板使之混匀，室温下（20-25℃）温育40min；
9.2.3 洗板：甩干孔中液体，用洗涤工作液（300μl/孔）充分洗涤微孔板4-5次，后一次应在吸水纸上拍打以完全除去孔中液体；
9.2.4显色：洗涤程序完成后，立即用微量移液器在每个微孔中先加入50μl底物液A，再加 50μl底物液B，轻微晃动反应板使之混匀，室温下（20-25℃）温育15min；
9.2.5读值：每孔中加入50μl终止液，混匀，在450nm下检测吸光度值，结果在5min内读取。
10 结果计算
本试剂盒配套使用快灵log/logit计算程序对检测结果进行定量换算。如果无该计算程序，请联系公司销售人员或致电公司
11 交叉反应
黄曲霉毒素B1
黄曲霉毒素B2 150%
黄曲霉毒素G1 32%
黄曲霉毒素G2 3%
12 试剂盒性能参数
本试剂盒检测下限为1.0 ng/ml
B0吸光度佳值应大于0.8，小于0.8则认为变质
试剂盒吸光度板内误差小于8％，板间误差小于15％
用本说明书提供的样本提取方法回收率90±10%
13 分析限制
本试剂盒检测为阳性的样品，建议用其他方法如HPLC加以确认。
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