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莱克多巴胺酶联试剂盒[食品安全试剂盒>激动剂检测试剂盒]
1 概述
莱克多巴胺属β-受体激动剂类。它可以加快畜禽生长速度，降低酮体脂肪含量，提高瘦肉率，且价格低廉，因此其非法应用者不断增多。卫生部、农业部、药品监督管理局发出的公告明确禁止莱克多巴胺在食用动物中使用。
本试剂盒采用直接竞争酶联法，可对尿液、饲料、肉类组织中的莱克多巴胺进行快速定量检测。
2 原理
本试剂盒采用直接竞争一步法。酶标板微孔条上固相化的莱克多巴胺和标准品或样品中莱克多巴胺竞争结合酶标记莱克多巴胺抗体；通过洗涤洗掉未结合的标准品或样品中莱克多巴胺；再通过酶的专一性显色剂显色，根据显色的深浅来判断样品中莱克多巴胺含量。检测时设置标准曲线，通过标准曲线测定样品中莱克多巴胺的含量。
3 试剂盒组成
3.1莱克多巴胺酶标板：96孔
3.2 莱克多巴胺标准品：6瓶（1ml/瓶），分别是：
标准品 | ① | ② | ③ | ④ | ⑤ | ⑥ |
浓度ng/ml | 0 | 0.025 | 0.075 | 0.225 | 0.675 | 2.025 |
3.3 莱克多巴胺酶结合物：1瓶（6ml）
3.4样品复溶液：1瓶（30ml）
3.5浓缩洗涤液：1瓶（10×，50ml）
3.6 底物液A：1瓶（6ml）
3.7 底物液B：1瓶（6ml）
3.8 终止液：1瓶（6ml）
3.9 说明书：1份
3.10 质检报告：1份
4 需要而未提供的材料
4.1 酶标仪（检测波长450nm，参考波长630nm）
4.2 微量移液器
4.3 前处理所需试剂及相关仪器
5 贮存
5.1 试剂盒贮存于2-8℃，切勿冷冻
5.2 未用完的微孔板应该密封干燥保存
5.3 该产品有效期为12个月
6 注意事项
6.1 使用试剂盒前请仔细阅读说明书。
6.2 试剂盒使用前，将试剂恢复至室温（20-25℃）。
6.3 不要使用过期试剂盒；不同批号试剂盒中的试剂不得混
用；不同标准品、样品所用吸头不能混用。
6.4 避免所有试剂接触皮肤；混合试剂时应避免起泡。
6.5 浓缩洗涤液如有结晶属正常现象，实验前稀释使用。
7 试剂配制
7.1 洗涤工作液：
用去离子水将浓缩洗涤液按1：9体积进行稀释
例如：10ml洗涤工作液=1ml浓缩洗涤液+9ml去离子水
7.2提取液：
7.2.1 1M HCL溶液：取浓盐酸8.33ml加水定容至100ml。
7.2.2 组织提取液：用去离子水将1M HCL溶液按1：19体积进行稀释 （例如：5ml 1M HCL溶液+95ml去离子水）。准确称取8gNaCL固体溶于100ml稀释好的盐酸溶液中，振荡混匀，即得组织提取液。
8 样品处理程序
8.1 尿样
取50μl尿样直接进行检测分析（若尿样浑浊，过滤或离心至清亮，用上清液检测；尿样内莱克多巴胺含量高可用样品复溶液稀释）。(稀释系数1)
8.2 肉类组织、猪肝
方法一：准确称取2±0.05g均质物（均质前冲去样本中的血水）于15ml离心管中；入6ml组织提取液（配液7.2.2），振荡混匀；在室温5000r/min离心5min；取1ml上清液至2ml聚苯乙烯离心管中，加入20μl左右 1M氢氧化钠溶液混匀，调pH至7-8；取50μl用于分析。（稀释倍数4）
方法二：准确称取2±0.05g均质物（均质前冲去样本中的血水）于15ml离心管中；入6ml甲醇溶液，振荡混匀；在室温5000r/min离心5min；取1.5ml上清液到于玻璃管，并用50℃氮气流吹干；加0.5ml正己烷，再加入0.5ml样品复溶液，反复吹打溶解残留物；将液体移入到1ml的离心管中，去除上层有机层，取下层澄清液体50μl用于分析。（稀释倍数1）
8.3 饲料
用研钵研碎饲料，称2g±0.05g研碎的饲料样品加入2ml 1M HCL溶液，再加入 16ml去离子水，加入1.6gNaCL，振荡混匀；用5000r/min室温离心5min；取200μl上清液加入1.5ml离心管中，再加入800μl样品复溶液，振荡混匀；加入15μl左右 1M氢氧化钠溶液混匀，调pH至7-8；取50μl分析。（稀释倍数50）
9 酶免分析步骤
9.1实验准备
9.1.1预行编号，标记标准品和样品的位置，进行双孔检测（每次实验都须做标准曲线）
9.1.2使用前将所有试剂回升至室温,取所需数量的微孔条，将多余板条用试剂盒提供的自封袋重新密封同时排除里面空气，并立即放回2-8℃干燥保存
9.2分析步骤
9.2.1在标准品孔中加入50μl各标准品溶液，在各样品孔中加入50μl样品溶液；
9.2.2在所有孔中加入50μl的莱克多巴胺酶标记物溶液，轻微晃动反应板使之混匀，室温下（20-25℃）温浴40min；
9.2.3甩干孔中液体，用洗涤工作液（250μl/孔）洗涤微孔板4-5次，后一次应在吸水纸上拍打以完全除去孔中液体；
9.2.4洗涤程序完成后，立即用微量移液器在每个微孔中先加入50μl底物液A，再加 50μl底物液B，轻微晃动使之混匀；
9.2.5室温下（20-25℃）温浴15min，每孔中加入50μl终止液，混匀，在450nm下检测吸光度，结果在5min内读取。
10 结果计算
本试剂盒配套使用快灵log/logit计算程序对检测结果进行定量换算。如果无该计算程序，请联系公司销售人员或致电公司。
11 试剂盒其他参数
本试剂盒灵敏度为0.025ng/ml
尿样检测下限为0.025ng/ml
饲料检测下限为1.25ng/ml
肉类组织检测下限:方法一：0.1ng/ml;方法二：0.025ng/ml
尿液、猪肉样本回收率为90±15%
猪肝、饲料样本回收率为80±15%
试剂盒板内变异系数小于8%，板间变异系数小于15%
12 分析限制
本试剂盒检测为阳性的样品，应该用其他方法如HPLC加以确认。
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