氟喹诺酮类酶联试剂盒←食品安全试剂盒←残留检测试剂盒
1 概述
氟喹诺酮类是一类广谱高效抗菌,在临床上的应用相当。随着该类的应用及深入研究,一方面,有关氟喹诺酮类类的不良反应和耐药性报道越来越多,其潜在的严重不良反应逐渐受到人们的重视;另一方面,作为兽药和饲料添加剂而大量的用于动物,因而其残留在动物可食性产品中的可能性相对很大。这些残留物可直接对人造成危害外,更严重的是会对氟喹诺酮类类敏感的致病菌产生耐药性,从而间接危害人类健康。
本试剂盒采用竞争酶联法,测定牛肉、猪肉、羊肉、鸡肉等食品中的氟喹诺酮类残留。
2 原理
样品中的游离氟喹诺酮与酶标记的氟喹诺酮竞争结合酶标板微孔中固相化的氟喹诺酮特异性抗体,通过洗涤洗掉未结合的酶标记氟喹诺酮,再通过酶的专一性显色剂显色根据显色的深浅来判断样品中氟喹诺酮含量。根据竞争性原理,如果样品中的游离氟喹诺酮量少,则酶标记的氟喹诺酮结合的多,显色深,反之,则显色浅。检测时设置标准曲线,通过标准曲线测定样品中氟喹诺酮的含量。
3 试剂盒组成
3.1氟喹诺酮酶标板:96孔
3.2 氟喹诺酮标准品:6瓶(1ml/瓶),分别是:
标准品 | ① | ② | ③ | ④ | ⑤ | ⑥ |
浓度ng/ml | 0 | 1 | 3 | 9 | 27 | 81 |
3.3 氟喹诺酮酶结合物:1瓶(13ml)
3.4 浓缩洗涤液:1瓶(10×,50ml)
3.5 底物液A:1瓶(6ml)
3.6 底物液B:1瓶(6ml)
3.7 终止液:1瓶(6ml)
3.8 说明书:1份
3.9 质检报告:1份
4 需要而未提供的材料
4.1 酶标仪(检测波长450nm,参考波长630nm)
4.2 微量移液器
4.3 前处理所需试剂及相关仪器
5 贮存
5.1 试剂盒贮存于2-8℃,切勿冷冻
5.2 未用完的微孔板应该密封干燥保存
5.3 该产品有效期为12个月
6 注意事项
6.1 使用试剂盒前请仔细阅读说明书。
6.2 试剂盒使用前,将试剂恢复至室温(20-25℃)。
6.3 不要使用过期试剂盒;不同批号试剂盒中的试剂不得混
用;不同标准品、样品所用吸头不能混用。
6.4 避免所有试剂接触皮肤;混合试剂时应避免起泡。
6.5 浓缩洗涤液如有结晶属正常现象,实验前稀释使用。
7 试剂配制
7.1 洗涤工作液:
用去离子水将浓缩洗涤液按1:9体积进行稀释
例如:10ml洗涤工作液=1ml浓缩洗涤液+9ml去离子水
7.2 70%甲醇:
用去离子水将甲醇(分析纯)按7:3体积进行稀释
例如:10ml 10%甲醇=7ml 甲醇+3ml去离子水
8 样品处理程序
8.1牛肉、猪肉、羊肉、鸡肉等
用匀质器匀质组织样本,称取1g匀质物于离心管中,加入4ml 70%甲醇,振荡5分钟,5000g以上离心10分钟,取上清100ul加入100ul去离子水,混匀,取50ul用于检测(稀释倍数10)。
8.2鸡蛋
将鸡蛋黄和蛋清混匀。准确称取2g样本,加入5ml的水,混匀,加入5ml 70%甲醇水,振荡混匀,4000g离心5min,取50ul用于检测(稀释倍数5)。
9 酶免分析步骤
9.1实验准备
9.1.1预行编号,标记标准品和样品的位置,进行双孔检测(每次实验都须做标准曲线)
9.1.2使用前将所有试剂回升至室温,取所需数量的微孔条,将多余板条用试剂盒提供的自封袋重新密封同时排除里面空气,并立即放回2-8℃干燥保存
9.2分析步骤
9.2.1在标准品孔中加入50μl各标准品溶液,在各样品孔中加入50μl样品溶液;
9.2.2在所有孔中加入50μl的氟喹诺酮酶标记物溶液,轻微晃动反应板使之混匀,室温下(20-25℃)温浴30min;
9.2.3甩干孔中液体,用洗涤工作液(250ul/孔)洗涤微孔板4-5次,后一次应在吸水纸上拍打以完全除去孔中液体;
9.2.4洗涤程序完成后,立即用微量移液器在每个微孔中先加入50μl底物液A,再加 50μl底物液B,轻微晃动使之混匀;
9.2.5室温下(20-25℃)温浴15min,每孔中加入50μl终止液,混匀,在450nm下检测吸光度,结果在5min内读取。
10 结果计算
使用快灵Log/Logit计算程序对检测结果进行计算,将检测OD均值和标准品浓度输入,即可自动获得检测结果,再乘以稀释倍数,即为样品氟喹诺酮浓度。
11 特异性
恩诺沙星………… 环丙沙星…………
达氟沙星………… 75% 氧氟沙星………… 25%
洛美沙星………… 25% 诺氟沙星………… 15%
氟甲喹……………<0.1% 麻保沙星…………<0.1%
12 试剂盒其他参数
试剂盒样本检测下限为10ng/ml
B0吸光度佳值应大于1.0
试剂盒吸光度板内误差小于8%,板间误差小于15%。
13 分析限制
本试剂盒检测为阳性的样品,建议用其他方法如HPLC加以确认。