三聚氰胺酶联试剂盒
1 概述
三聚氰胺俗称密胺、蛋白精,是一种三嗪类含氮杂环有机化合物,被用作化工原料。它是白色单斜晶体,几乎无味,对身体有害,不可用于食品加工。
本试剂盒采用竞争酶联法,测定牛奶、奶粉、饲料中的三聚氰胺添加物的残留。
2 原理
样品中的游离三聚氰胺与预包被在板子上的三聚氰胺蛋白偶联物竞争结合酶标记三聚氰胺抗体,通过洗涤洗掉未结合的酶标记三聚氰胺抗体,再通过酶的专一性显色剂显色根据显色的深浅来判断样品中三聚氰胺含量。根据竞争性原理,如果样品中的游离三聚氰胺量少,则酶标记的三聚氰胺抗体与包被在板子上的三聚氰胺偶联物结合的多,显色深,反之,则显色浅。检测时设置标准曲线,通过标准曲线测定样品中三聚氰胺的含量。
3 试剂盒组成
3.1三聚氰胺酶标板:96孔
3.2 三聚氰胺标准品:6瓶(1ml/瓶),分别是:
标准品 | ① | ② | ③ | ④ | ⑤ | ⑥ |
浓度ng/ml | 0 | 1 | 4 | 16 | 64 | 256 |
3.3 三聚氰胺酶结合物:1瓶(6ml)
3.4 浓缩样本稀释液:1瓶(5×,30ml)
3.5 浓缩洗涤液:1瓶(10×,50ml)
3.6 底物液A:1瓶(6ml)
3.7 底物液B:1瓶(6ml)
3.8 终止液:1瓶(6ml)
3.9 说明书:1份
3.10 质检报告:1份
4 需要而未提供的材料
4.1 酶标仪(检测波长450nm,参考波长630nm)
4.2 微量移液器
4.3 前处理所需试剂及相关仪器
5 贮存
5.1 试剂盒贮存于2-8℃,切勿冷冻
5.2 未用完的微孔板应该密封干燥保存
5.3 该产品有效期为12个月
6 注意事项
6.1 使用试剂盒前请仔细阅读说明书。
6.2 试剂盒使用前,将试剂恢复至室温(20-25℃)。
6.3 不要使用过期试剂盒;不同批号试剂盒中的试剂不得混
用;不同标准品、样品所用吸头不能混用。
6.4 避免所有试剂接触皮肤;混合试剂时应避免起泡。
7 试剂配制
7.1 洗涤工作液:
用去离子水将浓缩洗涤液按1:9体积进行稀释
例如:10ml洗涤工作液=1ml浓缩洗涤液+9ml去离子水
7.2 样本稀释液:
用去离子水将浓缩样本稀释液按1:4体积进行稀释
例如:10ml样品稀释液=2ml浓缩样品稀释液+8ml去离子水
7.3 饲料样本提取液:60%甲醇水溶液
用去离子水将甲醇(分析纯)按3:2体积进行稀释
例如:10ml 60%甲醇=6ml 甲醇+4ml去离子水
8 样品处理程序
8.1 液态奶
取50μl液态奶于含有450μl样本稀释液的离心管中,充分振荡混匀;取50μl进行检测。 (稀释系数10)
8.2 奶粉
准确称取1±0.01g奶粉样品于50ml离心管;加入5ml去离子水,充分溶解;取100μl于新的离心管中,加入500μl样本稀释液,充分振荡混匀;取50μl进行检测。(稀释系数30)
8.3 酸奶
将酸奶充分振荡混匀并取50μl于含有950μl样本稀释液的离心管中;充分振荡混匀;取50μl进行检测。(稀释系数20)
8.4 饲料
取2±0.01g饲料加入8ml 60%甲醇水溶液,充分震荡混匀; 5000r/min离心10min;取2ml上清于离心管中,50-60℃水浴中,氮气流吹至剩余约0.5ml;用样本稀释液将总体积定容至3ml,充分震荡混匀;取100μl新的离心管中,加入400μl样本稀释液,充分震荡混匀;取50μl进行检测。(稀释系数30)
9 酶免分析步骤
9.1实验准备
9.1.1预行编号,标记标准品和样品的位置,进行双孔检测(每次实验都须做标准曲线)
9.1.2使用前将所有试剂回升至室温,取所需数量的微孔条,将多余板条用试剂盒提供的自封袋重新密封同时排除里面空气,并立即放回2-8℃干燥保存
9.2分析步骤
9.2.1在标准品孔中加入50μl各标准品溶液,在各样品孔中加入50μl样本溶液;
9.2.2在所有孔中加入50μl的三聚氰胺酶结合物溶液,轻微晃动反应板使之混匀,室温下(20-25℃)温浴40min;
9.2.3甩干孔中液体,用洗涤工作液(250μl/孔)洗涤微孔板4-5次,后一次应在吸水纸上拍打以完全除去孔中液体;
9.2.4洗涤程序完成后,立即用微量移液器在每个微孔中先加入50μl底物液A,再加 50μl底物液B,轻微晃动使之混匀;
9.2.5室温下(20-25℃)温浴15min,每孔中加入50μl终止液,混匀,在450nm下检测吸光度,结果在5min内读取。
10 结果计算
本试剂盒配套使用快灵log/logit计算程序对检测结果进行定量换算。如果无该计算程序,请联系公司销售人员或致电公司。
11 试剂盒其他参数
本试剂盒液态奶检测下限为10ng/ml
本试剂盒奶粉检测下限为30ng/ml
本试剂盒酸奶检测下限为20ng/ml
本试剂盒饲料检测下限为30ng/ml
液态奶、奶粉、酸奶回收率均为90±15%
饲料回收率为80±15%
试剂盒板内变异系数小于8%,板间变异系数小于15%。
12 分析限制
本试剂盒检测为阳性的样品,应该用其他方法如HPLC加以确认。